En 1931, la firme Letov reçut une commande de la part de l’Ilmavoimaat, c’est à dire l’aviation militaire finlandaise, pour adapter son avion d’entraînement et d’observation S-228 en avion de reconnaissance et d’attaque au sol. Le chantier commença immédiatement et il fut décidé de modifier le S-228 en profondeur. Tant et si bien que le nouvel avion, désigné S-328, n’avait plus grand chose en commun avec son prédécesseur. Il prit l’air pour la première fois en mars 1932. Les officiels finlandais faisaient traîner les discussions, si bien que le gouvernement tchèque devint le premier client à commander le nouvel avion en janvier 1933. Cette même année les Finlandais décidèrent finalement de commander le bombardier en piqué allemand Henschel Hs-123.
Le Letov S-328 était un monomoteur sesquiplan biplace disposant d’un armement relativement conséquent pour un appareil de cette catégorie. L’habitacle en tandem se trouve à l’air libre, cependant l’observateur dispose de surfaces vitrées dans le plancher et sur les côtés du fuselage. Celui-ci est intégralement en métal. Le train d’atterrissage fixe se caractérise à l’arrière par un patin orientable. Le moteur Bristol d’origine britannique est construit sous licence par Walter.
Les premiers avions tchèques entrèrent en service en 1935. Ces avions se virent immédiatement affectés à des missions de surveillance des frontières austro-tchèque et germano-tchèque. Devant la montée en puissance des nazis en Allemagne le gouvernement tchèque commanda plus de S-328 pour ses missions de reconnaissance. Lors de l’annexion de la région des Sudètes en 1938 par le Troisième Reich un total de quinze S-328 furent saisis par la Luftwaffe. Ces avions furent affectés à des missions de reconnaissance de jour près de la frontière avec les Pays-Bas. En 1938, Letov assembla quatre appareils de la version S-328V, des hydravions qui servirent pour le compte de la marine tchèque implantée en Yougoslavie. Ces hydravions n’embarquaient aucune bombe.